Close
Go To Macao Polytechnic University

2014/2015

抑制miR-221表達對膀胱癌細胞增殖和凋亡的影響

《腫瘤》,2014,34(10):879-887

Author(s)王義兵
傅斌
王共先
張霞麗
黃亮
郎斌
許曉源
劉仁升
郝超
Summary

目的
探討抑制微RNA(microRNA,miRNA,miR)-221表達對膀胱癌細胞增殖和凋亡的影響。


方法
將化學合成的miR-221抑制片段has-miR-221 inhibitor和miR-221抑制陰性無意義片段(陰性對照組)(has-miR-221inhibitor negative control)轉染至膀胱癌T24和J82細胞中,轉染5 h後,在熒光顯微鏡下觀察轉染效率;實時熒光定量PCR法檢測轉染48 h後,T24和J82細胞中miR-221的表達情況;MTT法檢測轉染24、48和72 h後,T24和J82細胞的增殖情況;RT-PCR和蛋白質印跡法檢測轉染48 h後,T24和J82細胞中p53上調凋亡調控因數(p53 upregulated modulator of apoptosis,PUMA)、Bax和Bcl-2 mRNA及蛋白的表達;FCM法和吖啶橙(acridine orange,AO)-溴化乙錠(ethidium bromide,EB)染色檢測轉染48 h後,T24和J82細胞的凋亡情況。


結果
Has-miR-221 inhibitor轉染至T24和J82細胞的效率分別為80%和90%。Has-miR-221 inhibitor轉染後,T24和J82細胞中miR-221的表達水準明顯低於陰性對照組和空白對照組(只加入轉染試劑)(P<0.05);轉染後T24和J82細胞的增殖抑制率高於陰性對照組和空白對照組(P<0.05),且呈時間依賴性;轉染組PUMA和Bax mRNA及蛋白的表達水準明顯高於陰性對照組和空白對照組(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白的表達水準明顯低於陰性對照組和空白對照組(P<0.05);has-miR-221 inhibitor轉染組T24和J82細胞的凋亡率明顯高於陰性對照組和空白對照組(P<0.05)。


結論
抑制miR-221的表達可抑制膀胱癌細胞的增殖,並促進其凋亡。


Top Top